Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者实质性缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出呼吸道自身毒素到显现出1同型心血管疾病诊疗病征的的发展亲率在幼儿末期就有很好的所述，多个呼吸道自身毒素乙型肝炎的幼儿中的有70%在毒素切换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的幼儿这一人口比例减小到84%。相比之下，占诊疗1同型心血管疾病一半以上的同型1同型心血管疾病的肺癌机制还没有得到充分的科学研究。

更为多的人开始用于分期系统会来判别1同型心血管疾病的的发展：生物体在显现出多种呼吸道自身毒素时踏入第1过渡阶段，显现出浓度异常时踏入第2过渡阶段，显现出病征时踏入第3过渡阶段。一些多发呼吸道自身毒素乙型肝炎的生物体，在1期和2期，的发展较迟，并发展为肺癌的1同型心血管疾病。我们在此之前所述了一分组在首次样品到多种呼吸道自身毒素样本后至寡10年无心血管疾病的较迟的发展者，这分组病人人数寡，但特征非常具体。随后，我们发现呼吸道自身抗原特异性CD8+T酶质质子化在的发展减迟的病人中的基本不存在，但在早先肺癌和近十年存在的心血管疾病病人中的很难以样品到。这有可能指出，与的发展病人相比，这些病人免疫性细胞的适度加强。

早期科学研究指出，尽管适度性T酶质(Treg)数量长时长，但心血管疾病病人存在一些动态原因，其中的之外对IL-2的质子化灵活性降低。此外，心血管疾病病人中的的不稳定性CD4+T酶质有可能对适度更具抵抗性，表现为不稳定性T酶质的抑制作用加强，其本质转化成的Treg和人体内转化成的游离Treg，以及抗原个人经历的CD4+T酶质中的IL-2质子化加强。本科学研究的意在是所述了CD4+适度性T酶质(Treg)在一小群极减迟的发展者中的的特征，他们的平均比亲率为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以这群人进一步将的垂直科学研究，在21岁以下肺炎的病人亲人中的核查1同型心血管疾病的危险因素。我们在此之前所述了近十年减迟的发展者的特征，他们保有多重呼吸道自身毒素乙型肝炎超过10年，但没有显现出心血管疾病的诊疗病征，迟性或非完成性免疫性。随后，10名继续保有无心血管疾病并愿意提供大量体内样本的减迟的发展者纳入T和B酶质动态分析。在目前的科学研究中的，8名迟的发展者(SP分组)，中的位比亲率43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身毒素乙型肝炎。所有的发起者都处于1同型心血管疾病的发展的1期，尽管一些人随后夺去了呼吸道自身毒素对某些抗原的乙型肝炎质子化，然而，一名病人已经处于2期至寡6年，但没有显现出诊疗病征，一名病人被诊断为心血管疾病，该人脑72岁，在采集检验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计分析中的对该NADPH完成了基本上评估。分立外周血单个核酶质(PBMCs)，采用多表达式流式酶质术和T酶质抑制作用试验评估NADPH中的Treg的振幅、表同型和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)完成无行政官员聚类分析，评估Treg表同型。

结果：与心理健康NADPH相比，来自迟的发展体的清醒CD4+T酶质的行政官员聚类推测，抑制的清醒CD4+ Treg振幅减小，与糖皮质激素游离的TNFR相关酶(GITR)解读减小有关。一名HbA1c升高的病人与的发展减迟者和冗余的对照分组相比，Treg谱有所不同。动态最近，与心理健康NADPH相比，来自减迟的发展体的Treg介导的CD4+不稳定性T酶质抑制作用明显损坏。表现为对不稳定性CD4+T酶质CD25和CD134解读的抑制作用减小。

所示1 深入的表同型分析推测，CD4+Treg亚同型在迟的发展缓冲区中的减小。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -酶质上。根据上标物解读认定出10个元簇:清醒T酶质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T酶质;HLA-DR + GITR +清醒T酶质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个不同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在路由器分组一处上色。每个路由器中的的饼所示声称单个上标的解读分级。(b)每个元聚类的热所示，以推测整体上标解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成所示，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对同位素为每个metacluster箱曲新线所示(同位素> 0.05%)已确定为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T酶质(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T酶质(l)。浅蓝色左上方代表理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩筛选。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的预测模同型证实，Treg振幅的减小是的发展减迟的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和冗余的HD发起者在CD4+CD45RA−T酶质上的差异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的民族特色所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR解读完成分立，建模FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(星点)分组以及NADPHSP 606(浅蓝色)中的CD25+ cd127的振幅概要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯闭包的箱曲新线所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度上色，箭头突出的簇被定位为SP和HD缓冲区错综复杂的不同。(j)箱曲新线所示推测了在SP(星点)和HD(灰点)分组中的，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对同位素(人口比例)。(k)直方所示推测每个簇的表同型(黄色)和Treg上标相对解读与历史背景解读(深蓝色);上列，CPUTreg_3;示例一行，CPUTreg_4。历史背景与所有其他簇中的上标的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩筛选

所示3 与心理健康献血者相比，的发展减迟者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T酶质元簇(清醒T酶质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T酶质;HLA-DR + GITR +清醒T酶质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的解读热所示(sp606不之外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，推测直方所示(c)和概要所示(d)。Wilcoxon类推符号秩和筛选，p< 0.07(浅蓝色)所有NADPH之外，p< 0.05(深蓝色)NADPHSP 606和冗余的HD不之外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR解读，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，推测直方所示(e)和概要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩筛选

所示4 来自减迟的发展的CD4+ treg酶质控制不稳定性CD4+T酶质的灵活性降低。SP分组用深蓝色的新线和左上方声称，HD分组用紫色的新线和左上方声称，浅蓝色的新线/左上方声称NADPHsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T酶质完成分选。CD4+CD25−(转发者)被上标为CFSE, Treg按判读的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活化酶质，人才3天后完成流式酶质术样品。(a-d)与CD4+转发者相对应的treg人才(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。用于乙型肝炎对照(抑制的鼓动酶质仅有treg)近似值抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 不稳定性CD4+T酶质对减迟的发展的T酶质活化的抑制作用更引人注意。SP分组用深蓝色的新线和左上方声称，HD分组用紫色的新线和左上方声称，浅蓝色的新线/左上方声称NADPHsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T酶质完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上标，treg按判读的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活化酶质，人才3天后完成流式酶质术(CD25反染)和酶质因侄分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者协同人才。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑制作用百份(b)。(c,d) CD25抑制作用百份(c)和CD134抑制作用百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中的的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自减迟的发展侄的活化清醒CD4+Treg在GITR解读中的得到了扩展和丰富，强调了全面性科学研究Treg在1同型心血管疾病几率生物体中的的表型的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28